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Fluorescent Microscopy is established in many scientific areas as a standard method.

Nowadays, most systems use changeable optical filters and monochrome cameras for image acquisition. Since the spectral signature of fluorescent radiation is a key indicator for analytics, our hyperspectral camera systems include this dimension.

With the HSI-cameras, the spectral analysis based on the single recording is possible. Especially with live samples, which can change during the course of an analysis, this is an important and very useful feature.
Currently, our systems are used in several research projects regarding this subject. For these, our TIVITA® Tissue is attached to a fluorescent microscope via C-Mount adapter, as shown in the image below.

Working station with fluorescent microscope and connected TIVITA™ Tissue

Working station with fluorescent microscope and connected TIVITA® Tissue

First results show that it is possible to apply the HSI-technology in the area of fluorescence. Our research partner GMBU Jena recorded and analyzed the images below. In order to acquire the different pseudo-color images, markers have to be set in the regular color photography taken through the microscope. Via the contained spectra, different pseudo-color images can be created by using different mathematical models.

Cyanobakterien und Protoberberin: Anregung bei 470 nm. Dargestellt sind das Intensitätsbild bei 610nm (links oben), die Intensitätsspektren der ausgewählten Marker-Bereiche (rechts oben), PCA-Falschfarbenbild (links unten) und die „Principal Component“ – Bilder und die Farbauswahl für das PCA-Modell (rechts unten)

Cyanobacteria and Protoberberin: Excitation at 470 nm. Shown are the intensity image at 610nm (top left), the intensity spectra of the selected marker areas (top right), PCA false color image (bottom left) and the Principal Component images and color selection for the PCA model (bottom right)

Cyanobakterien und Protoberberin: Anregung bei 470 nm. Dargestellt sind das Intensitätsbild bei 580nm (links oben), die SNV-transformierten Intensitätsspektren der ausgewählten Marker-Bereiche (rechts oben), PCA-Falschfarbenbild (links unten) und die „Principal Component“ – Bilder und die Farbauswahl für das PCA-Modell (rechts unten)

Cyanobacteria and Protoberberin: Excitation at 470 nm. Shown are the intensity image at 580nm (top left), the SNV-transformed intensity spectra of the selected marker areas (top right), PCA false color image (bottom left) and the “Principal Component” images and the color picker for the PCA model (bottom right)

Pflanzenblatt mit Tropfen Fluoreszenzfarbstoff: Anregung bei 470 nm. Dargestellt sind das Intensitätsbild bei 755nm (links oben), die SNV-transformierten Intensitätsspektren der ausgewählten Marker-Bereiche (rechts oben), PCA-Falschfarbenbild (links unten) und die „Principal Component“ – Bilder und die Farbauswahl für das PCA-Modell (rechts unten)

Plant leaf with drops Fluorescent dye: excitation at 470 nm. The intensity image at 755 nm (top left), the SNV-transformed intensity spectra of the selected marker areas (top right), PCA false-color image (bottom left) and the “Principal Component” are shown. Pictures and color choice for the PCA model (bottom right)

FocalCheck™ Fluoreszenzmikroskopie Test-Slide #2: Anregung bei 470 nm. Dargestellt sind das Intensitätsbild bei 610nm (links oben), die Intensitätsspektren der ausgewählten Marker-Bereiche (rechts oben), Correlation-Falschfarbenbild (links unten) und die „Correlation Koeffizienten“ – Bilder und die Farbauswahl für das PCA-Modell (rechts unten)

FocalCheck ™ Fluorescence Microscopy Test-Slide # 2: Excitation at 470 nm. Shown are the intensity image at 610nm (top left), the intensity spectra of the selected marker areas (top right), correlation false-color image (bottom left) and the “Correlation coefficients” – Pictures and color choice for the PCA model (bottom right)